Composizione chimica dell'acciaio inossidabile 347 L'entità delle risposte delle cellule T venose o capillari, specifiche per SARS-CoV-2, determina l'immunità al COVID-19.

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Composizione chimica dell'acciaio inossidabile 347

Composizione chimica del tubo a spirale in acciaio inossidabile 347

La composizione chimica e le proprietà meccaniche del tubo a spirale in acciaio inossidabile 347 sono le seguenti:
- Carbonio – 0,030% massimo
- Cromo – 17-19%
- Nichel – 8-10,5%
- Manganese – 1% massimo

Proprietà meccaniche del tubo a spirale in acciaio inossidabile 347

Secondo il produttore del tubo a spirale in acciaio inossidabile 347, le proprietà meccaniche del tubo a spirale 347:
- Resistenza alla trazione (psi) – 75.000 min
- Resistenza allo snervamento (psi) – 30.000 min
- Allungamento (% in 2″) – 25% min
- Durezza Brinell (BHN) – 170 max

Applicazioni e usi del tubo a spirale in acciaio inossidabile 347

• Tubo a spirale in acciaio inossidabile 347 utilizzato negli zuccherifici.
• Tubo a spirale in acciaio inossidabile 347 utilizzato nel fertilizzante.
• Tubo a spirale in acciaio inossidabile 347 utilizzato nell'industria.
• Tubo a spirale in acciaio inossidabile 347 utilizzato nelle centrali elettriche.
• Tubo a spirale in acciaio inossidabile 347 utilizzato nel settore alimentare e lattiero-caseario.
• Tubo a spirale in acciaio inossidabile 347 utilizzato negli impianti di petrolio e gas.
• Produttore di tubi a spirale in acciaio inossidabile 347 utilizzato nell'industria della costruzione navale.

Si ritiene che le cellule T specifiche della SARS-CoV-2 proteggano dall’infezione e dalla progressione del COVID-19, ma non esiste alcuna prova diretta a riguardo.Qui, abbiamo confrontato le misurazioni del sangue intero delle cellule T positive all’interferone-γ specifiche per SARS-CoV-2 con i risultati positivi dei test diagnostici COVID-19 (PCR e/o flusso laterale) entro 6 mesi dalla raccolta del sangue di Lian.Tra i 148 partecipanti che hanno donato campioni di sangue venoso, l’entità della risposta delle cellule T specifica per SARS-CoV-2 è stata significativamente più elevata in coloro che sono rimasti protetti rispetto a quelli che erano infetti (P ​​<0,0001).% di rischio di infezione, mentre l'alta intensità ha ridotto questo rischio al 5,4%.Questi risultati sono stati generalizzati ad altri 299 partecipanti che hanno testato un test del sangue capillare scalabile che potrebbe facilitare l’accesso ai dati sull’immunità delle cellule T su scala di popolazione (14,9% contro 4,4%).Pertanto, la misurazione delle cellule T specifiche per SARS-CoV-2 può prevedere il rischio di infezione e dovrebbe essere valutata durante il monitoraggio dello stato immunitario individuale e della popolazione.
Misurare e comprendere la risposta immunitaria all’infezione da SARS-CoV-2 è importante per sviluppare strategie future efficaci per ridurre al minimo gli impatti economici e sulla salute pubblica dei futuri focolai di COVID-19.L’identificazione dei correlati immunitari fornirà informazioni importanti sulla suscettibilità di una popolazione alle infezioni virali, possibilmente un allarme precoce del picco di ricoveri ospedalieri e consentirà inoltre alle persone di gestire personalmente il rischio di infezione e il rischio di infettare gli altri.La sorveglianza immunitaria si è rivelata fondamentale per valutare l’efficacia dei vaccini COVID-19 in pazienti sani e ad alto rischio1,2,3 soprattutto nei mutanti SARS-CoV-24, e il rilevamento di immunocompromessi comporterà la necessità di rafforzare l’immunità. Vaccinarsi e prevenire futuri focolai.
Il livello di immunità di un individuo all'infezione da SARS-CoV-2 dipende da molteplici fattori: carica virale al momento dell'esposizione, varianti del virus, età, precedente stato di vaccinazione/infezione, comorbilità, farmaci e, soprattutto, infezione da anti-SARS-CoV .2la risposta immunitaria adattativa si verifica al momento dell'esposizione al virus5.La valutazione della risposta immunitaria all'infezione da SARS-CoV-2 e/o alla vaccinazione si è concentrata su test sierologici che misurano la presenza di anticorpi specifici per una proteina strutturale (ad esempio glicoproteina spike).Tuttavia, la presenza o l’assenza di anticorpi da sola non determina con precisione una risposta immunitaria protettiva, poiché le risposte vengono significativamente attenuate nel tempo6 e la neutralizzazione delle varianti SARS-CoV-2 negli individui in convalescenza o doppiamente vaccinati Attività debole, che potrebbe portare a un ampio numero di infezioni rivoluzionarie7.In effetti, la protezione contro il COVID-19 sintomatico causato dalla variante Omicron (B.1.1.529) è scesa a circa il 10% dopo soli 4-6 mesi di vaccinazione con mRNA, sebbene la protezione contro la malattia grave sia persistita >68% per almeno 7 mesi8.La misurazione delle risposte delle cellule T della memoria adattativa, che conferiscono protezione a lungo termine contro l’infezione virale, è il miglior indicatore di suscettibilità all’infezione da SARS-CoV-2, e quindi una migliore indicazione del rischio di risultare positivi per COVID-199, poiché le cellule T specifiche le cellule possono prevenire l’infezione.senza sieroconversione10,11.Tuttavia, la misurazione delle risposte delle cellule T ha ricevuto meno attenzione a causa di difficoltà metodologiche e problemi logistici nell’ottenimento e nel trasporto di campioni di sangue venoso, soprattutto quando si conducono ampi studi osservazionali per valutare l’efficacia del vaccino e monitorare l’immunità.Tuttavia, gli individui vaccinati mostrano una robusta attività delle cellule T contro le varianti SARS-CoV-2, compensando potenzialmente la perdita di reattività anticorpale per limitare la gravità di COVID-1912,13.
Qui, abbiamo cercato di capire se una singola misurazione della risposta delle cellule T SARS-CoV-2 potesse prevedere il rischio assoluto di infezione da SARS-CoV-2 entro 6 mesi dal prelievo di sangue, indipendentemente dai precedenti fattori di influenza immunitaria.Per rendere il test delle cellule T ad alta produttività e applicabile a studi più ampi, abbiamo anche cercato di miniaturizzare il test in modo che possa essere eseguito utilizzando un campione di sangue capillare prelevato dal polpastrello.
Abbiamo misurato le risposte immunitarie cellulari e umorali in donatori sani utilizzando un rilevamento combinato di cellule T SARS-CoV-2 e anticorpi IgG basato su sangue venoso intero (per le caratteristiche dei partecipanti, vedere marzo 2022 14. Nei donatori vaccinati, SARS-CoV-2- le risposte T-cellulari specifiche sono state determinate misurando i livelli plasmatici di interferone-γ (IFN-γ) dopo stimolazione del sangue intero con il peptide SARS-CoV-2 (come in precedenza, rif. 14,15,16,17,18) e le risposte IgG associate con nucleocapside (N) erano aumentati in coloro che avevano riportato un'infezione precedente, sebbene entrambe le risposte fossero più elevate nei donatori non vaccinati precedentemente infetti, massime nel corpo (Fig. 1a, b).Risposte IgG contro le glicoproteine ​​​​spike (RBD, S1, S2) erano più alti nei donatori vaccinati precedentemente infetti (Figura 1c-e).
a Le risposte delle cellule T IFN-γ+ specifiche per SARS-CoV-2 sono state misurate mediante analisi del sangue intero venoso e in base alle vaccinazioni dei partecipanti e al precedente stato di infezione da SARS-CoV-2 (confermato mediante PCR e/o test a flusso laterale)' Vac + /Inf +' n = 60 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 82 (blu), 'Vac-/Inf +' n = 4 (giallo), 'Vac-/Inf-' n = 1 (non applicato).Le reazioni di legame delle IgG specifiche per SARS-CoV-2 prendono di mira il nucleocapside (“N”) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), dominio di legame del recettore (“RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), subunità picco 1 (“S1”) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) e la subunità di picco 2 (“S2”) (e) sono stati misurati mediante esami del sangue intero venoso e sulla base della vaccinazione dei partecipanti e di precedenti casi di SARS -CoV-2 (confermati mediante PCR e/ o test del flusso laterale) stato infettivo.'Vac + /Inf +' n = 60 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (blu), 'Vac-/Inf +' n = 4 (giallo).I confronti sono stati effettuati utilizzando il test di Kruskal-Wallis, aggiustato per confronti multipli utilizzando il test di Dunn.I dati vengono visualizzati come grafici (linea centrale sulla mediana, limite superiore al 75° percentile, limite inferiore al 25° percentile) con i baffi ai valori minimo e massimo.Ogni punto rappresenta un donatore.I dati grezzi vengono forniti sotto forma di file di dati grezzi.
Dopo il prelievo di sangue, ai partecipanti è stato chiesto di autosegnalare i risultati positivi del test PCR e/o del flusso laterale per COVID-19;se i partecipanti risultavano positivi tra il 1 settembre 2021 e il 29 dicembre 2021, si presumeva che fossero infetti dalla variante Delta (B.1.617.2) del coronavirus e Omicron (B.1.1.529) alla Public Health Wales dopo il 29 dicembre 2021, quando questa opzione di preoccupazione diventa dominante.Tra 148 donatori valutabili, abbiamo osservato un tasso di infezione del 26,3% (39/148) entro 6 mesi dalla donazione di sangue, 38 dei quali hanno ricevuto una seconda o terza dose del vaccino COVID-19 (la svolta dell’infezione è avvenuta dopo Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) vaccino mRNA o vaccino AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));è risultato infetto anche un donatore non vaccinato.L’entità delle risposte delle cellule T positive all’IFN-γ specifiche per SARS-CoV-2 è stata significativamente inferiore in coloro che hanno riportato un test diagnostico positivo per COVID-19 rispetto ai donatori non infetti (P ​​<0,0001; Fig. 2a), principalmente a causa di induzione ottimale delle risposte delle cellule T mediante vaccinazione in alcuni partecipanti (P ​​= 0,050; Figura 1 supplementare).Non è stata riscontrata alcuna correlazione tra l'entità della risposta delle cellule T IFN-γ+ e il tempo necessario per ottenere un risultato positivo del test COVID-19 (Figura 2 supplementare).Al contrario, né le risposte IgG leganti RBD, S1, S2 (Figure 2b-d) né le risposte anticorpali neutralizzanti RBD, S1 erano specifiche per SARS-CoV-2 wild-type o delta (B.1.617).) (Figura 3 supplementare) può distinguere tra le persone a rischio di infezione.Tuttavia, basse risposte IgG legate all’N contro SARS-CoV-2 erano correlate al rischio di infezione da COVID-19 (P = 0,0084; Figura 2e);coloro che sono risultati positivi avevano l’85% di probabilità in meno (P = 0,00035; OR 0,15, 95).% IC: 0,047–0,39 (Figura supplementare 4).
Campioni di sangue venoso provenienti da donatori sani (n = 148) hanno valutato le risposte delle cellule T IFN-γ+ specifiche per SARS-CoV-2 (a; ****P <0,0001) e il legame del recettore Spike allo specifico SARS-CoV -2 stimolo.dominio (“RBD”) (b), subunità picco 1 (“S1″) (c), subunità picco 2 (“S2″) (d) e nucleocapside (“N”) (e; **P = 0,0084) .Identificati i partecipanti risultati positivi al COVID-19 (PCR e/o flusso laterale);tutte le infezioni si sono verificate entro 6 mesi dal prelievo di sangue.I confronti sono stati effettuati utilizzando il test di Mann-Whitney a due code.I dati vengono visualizzati come grafici (linea centrale sulla mediana, limite superiore al 75° percentile, limite inferiore al 25° percentile) con i baffi ai valori minimo e massimo.Ogni punto rappresenta un donatore.ns non è importante.La mappa termica f mostra le correlazioni di rango di Spearman tra le variabili per il set di dati specificato.I confronti non statisticamente significativi sono stati esclusi dalla matrice e contrassegnati con celle vuote.I dati grezzi vengono forniti sotto forma di file di dati grezzi.
Il cut-off diagnostico positivo preimpostato di 14 è stato considerato troppo arbitrario per valutare il rischio di reinfezione, pertanto sono stati stabiliti intervalli interquartili per stabilire i parametri di rischio assoluto.Il modello statistico, che includeva solo variabili che avevano un effetto significativo sui risultati, ha mostrato che l’entità della risposta delle cellule T IFN-γ+ specifica per SARS-CoV-2 era il biomarcatore immunitario più importante per determinare le probabilità di un individuo di essere testato per COVID.-19 positivi (Figura 2f e Figura 4 supplementare).Pazienti con una risposta delle cellule T IFN-γ+ specifica per SARS-CoV-2 nel terzo (194-489 pg/ml IFN-γ) e nel quarto (>489 pg/ml IFN-γ) quartili 65% (P = 0,055; OR 0,35, IC 95%: 0,11–1,00) e il 90% (P = 0,0050; OR 0,098, IC 95%: 0,014–0,42) avevano più partecipanti.Le possibilità sono scarse (Figura 4 supplementare).Nel complesso, i partecipanti con una risposta delle cellule T specifica per SARS-CoV-2 dal sangue venoso ≤79 pg/ml di IFN-γ avevano un rischio del 43,2% di infezione rivoluzionaria a 6 mesi, rispetto a una risposta> 489 pg/ml.ml di IFN-γ avevano un rischio di infezione del 5,4% (tabella 2).
L’esame del sangue intero venoso ha una portata limitata a causa della necessità di raccogliere i campioni da parte del prelievo.Per aumentare la disponibilità dei test delle cellule T e delle IgG per SARS-CoV-2, è stato sviluppato un metodo alternativo di campionamento del sangue capillare per consentire ai partecipanti di ottenere campioni di sangue dal polpastrello a casa.Per quanto ne sappiamo, non ci sono stati rapporti precedenti sulla misurazione della funzione delle cellule T antigene-specifiche nei campioni di sangue capillare.In precedenza è stata dimostrata una forte correlazione tra le conte dei linfociti ottenute utilizzando campioni di sangue capillare e venoso comparabili.Inoltre, è stato riferito che i test basati sul sangue intero che misurano le risposte delle cellule T specifiche della SARS-CoV-2 utilizzano solo 320 μL di sangue venoso,20 eliminando le preoccupazioni sulla frequenza delle cellule T progenitrici nei campioni di sangue capillare.
Abbiamo utilizzato questo test collaborativo standardizzato ad alto rendimento di cellule T SARS-CoV-2 e anticorpi IgG basati su sangue intero capillare per misurare la risposta immunitaria cellulare e umorale nei partecipanti con varie comorbidità e precedente stato di vaccinazione/infezione (Tabella 1).reclutati da tutto il Regno Unito tra il 24 gennaio e il 14 marzo 202214. La maggior parte (90,9%) dei campioni di dita sono stati ottenuti correttamente e inviati al laboratorio entro 24 ore dalla raccolta.In alcuni casi, i campioni sono stati ricevuti entro 48 ore dal prelievo di sangue, ma nessuno di questi campioni ha superato i controlli di qualità e non ha influenzato le misurazioni complessive delle cellule T o degli anticorpi (Figura 5 supplementare).Sebbene vi fossero differenze nell’entità della risposta delle cellule T IFN-γ+ specifica per SARS-CoV-2 misurata nei rispettivi campioni di sangue capillare e venoso in alcuni individui, non vi erano differenze significative nel complesso (P = 0,88; Figura 6 supplementare ).).
Le risposte delle cellule T IFN-γ+ specifiche per SARS-CoV-2 erano significativamente aumentate nei soggetti vaccinati che avevano anche riportato un'infezione precedente (P = 0,0001), ma non significativamente più elevate rispetto ai donatori non vaccinati precedentemente infetti (P ​​= 0,19, Fig. 3a).).Le risposte IgG contro la glicoproteina del picco (RBD, S1, S2) erano significativamente più elevate nei donatori vaccinati rispetto ai donatori non vaccinati, indipendentemente dal precedente stato di infezione (Figura 3b-d).È interessante notare che la risposta media delle IgG legate all'N è stata più alta nei partecipanti non vaccinati precedentemente infetti rispetto ai partecipanti vaccinati, sebbene ciò non abbia raggiunto la significatività (Figura 3e).Tra i donatori non vaccinati e non infetti che si sono autodichiarati, 15 partecipanti su 37 (40,5%) erano positivi per IgG N-linked, al di sopra della soglia precedentemente stabilita di 2,0 BAU/mL14;questi 15 partecipanti Dodici di questi pazienti sono risultati positivi per la risposta delle cellule T IFN-γ+ superiore alla soglia precedentemente stabilita di 22,7 pg/ml di IFN-γ14.Pertanto, è probabile che questi partecipanti fossero stati precedentemente infettati da SARS-CoV-2 e non fossero stati testati per COVID-19 a causa di scelta personale, mancanza di PCR e/o apparecchiature a flusso laterale, oppure fossero asintomatici.Sebbene vi sia stata una correlazione significativa tra le risposte delle cellule T all'IFN-γ+ e i livelli di IgG N-linked nei donatori non vaccinati (P ​​= 0,0044; Figura supplementare, la risposta IgG N-linked è diminuita più rapidamente della risposta IgG N-linked, mentre l'IFN-γ + Le risposte delle cellule T sono state mantenute indipendentemente dallo stato di vaccinazione, sebbene il numero di donatori a 50 settimane dopo il test fosse basso (Figura 8 supplementare). Il tipo di vaccinazione era generalmente poco diverso nelle risposte IgG osservate specifiche per SARS-CoV-2, T cellule e associate a RBD, sebbene i partecipanti che hanno ricevuto due dosi di BNT162b2 seguite da rivaccinazione con mRNA1273 abbiano mostrato livelli significativamente più alti di cellule T IFN-γ + erano più sensibili a SARS-CoV-2 rispetto a quelli che hanno ricevuto due dosi di ChAdOx1 e BNT162b2 (Supplementare Fig. 9) Inoltre, le comorbilità segnalate presentavano una piccola differenza complessiva nelle risposte delle cellule T osservate rispetto ai donatori sani (Fig. 10 supplementare).
a Le risposte delle cellule T IFN-γ+ specifiche per SARS-CoV-2 sono state misurate mediante test capillare su sangue intero e si basavano sulle vaccinazioni dei partecipanti e sul precedente stato infettivo SARS-CoV-2 (confermato mediante PCR e/o test a flusso laterale).'Vac + /Inf +' n = 42 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 158 (blu), 'Vac-/Inf +' n = 33 (giallo), 'Vac- /Inf-' n = 37 (grigio).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- rispetto a Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ rispetto a Vac-/Inf-) P = 0,014 .Reazioni di legame delle IgG specifiche per SARS-CoV-2 al dominio di legame del recettore del picco (“RBD”) (b; ****P < 0,0001, ns: non significativo), subunità 1 del picco (“S1”) (c; * * **P < 0,0001, ns: non significativo), subunità spike 2 (“S2″) (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016 ) e nucleocapside (“N”) (e; ****P < 0,0001, ns non significativo) sono stati misurati utilizzando l'analisi del sangue intero venoso e sulla base delle vaccinazioni dei partecipanti e di precedenti SARS-CoV-2 (confermati mediante PCR e/o analisi del flusso laterale). Le infezioni sono state suddivise per stato.'Vac + /Inf +' n = 46 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 182 (blu), 'Vac-/Inf +' n = 34 (giallo), 'Vac-/Inf-' n = 37 (grigio).I confronti sono stati effettuati utilizzando il test di Kruskal-Wallis, aggiustato per confronti multipli utilizzando il test di Dunn.I dati vengono visualizzati come grafici (linea centrale sulla mediana, limite superiore al 75° percentile, limite inferiore al 25° percentile) con i baffi ai valori minimo e massimo.Ogni punto rappresenta un donatore.I dati grezzi vengono forniti sotto forma di file di dati grezzi.
Come prima, ai partecipanti è stato chiesto di riportare risultati positivi alla PCR e/o al flusso sanguigno laterale per COVID-19;secondo l’Agenzia sanitaria britannica, si presumeva che i partecipanti fossero stati infettati dal coronavirus Omicron (B.1.1.529) al momento del test della variante positiva del virus, poiché era la variante dominante nel Regno Unito durante il periodo di studio.Tra 299 donatori valutabili, abbiamo osservato un tasso di infezione dell’8,0% (24/299) entro tre mesi dalla donazione di capillari, sette dei quali non erano vaccinati.La percentuale di comorbidità tra tutti i partecipanti era inferiore in coloro che erano risultati positivi per COVID-19 (10,7%) rispetto a quelli che erano risultati negativi per COVID-19 (24,4%, Tabella 1), il che potrebbe essere dovuto al fatto che i partecipanti con determinati le malattie sono più attente e proteggono da potenziali conseguenze come il diabete e il cancro.Come osservato in una coorte di sangue venoso, cellule T positive all’interferone-γ specifico per SARS-CoV-2 (IFN-γ) misurate in campioni di sangue capillare di individui che hanno riportato un test diagnostico positivo per COVID-19.L'entità della risposta è stata significativamente inferiore rispetto ai donatori non infetti (P ​​= 0,034; Figura 4a) a causa dell'induzione relativamente scarsa di una risposta delle cellule T mediante vaccinazione e/o precedente infezione (Figura 11 supplementare).Allo stesso modo, né le risposte IgG leganti RBD, S1, S2 (Figure 4b-d) né le risposte anticorpali neutralizzanti RBD, S1 erano specifiche per SARS-CoV-2 wild-type o delta (B. 1.617).(Figura supplementare 12).Gli individui a rischio significativo di infezione possono essere identificati.A differenza della coorte venosa, anche le risposte IgG N-correlate non differenziano il rischio COVID-19 (Figura 4e), suggerendo che la variante Omicron (B.1.1.529) aumenta l'evasione immunitaria in individui precedentemente infetti, come recentemente descritto 21. Al contrario, la forza della risposta delle cellule T IFN-γ specifica per SARS-CoV-2 è stata ancora una volta la variabile più importante nel determinare le probabilità individuali di risultare positivi per COVID-19 (Figura 4f).Complessivamente, i partecipanti con una risposta delle cellule T capillari specifiche per SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/mL IFN-γ avevano un rischio di infezione del 14,9% a tre mesi rispetto a una risposta >141,6 pg/mL.ml di IFN.-γ aveva un rischio di infezione del 4,4% (Tabella 2).
Risposte delle cellule T IFN-γ+ specifiche per SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) e dominio di legame del recettore mirato alle IgG specifico per SARS-CoV-2 (“RBD”) (b), subunità 1 del picco (' S1′) (c), subunità spike 2 ("S2′) (d) e reazione di legame del nucleocapside ("N") (e).Partecipanti identificati come positivi ai test COVID-19 (PCR e/o test del flusso sanguigno laterale), tutte le infezioni si sono verificate entro 3 mesi dal prelievo di sangue.I confronti sono stati effettuati utilizzando il test di Mann-Whitney a due code.I dati vengono visualizzati come grafici (linea centrale sulla mediana, limite superiore al 75° percentile, limite inferiore al 25° percentile) con i baffi ai valori minimo e massimo.Ogni punto rappresenta un donatore.ns non è importante.La mappa termica f mostra le correlazioni di rango di Spearman tra le variabili per il set di dati specificato.I confronti non statisticamente significativi sono stati esclusi dalla matrice e contrassegnati con celle vuote.I dati grezzi vengono forniti sotto forma di file di dati grezzi.
Mentre entriamo nella fase successiva della pandemia di COVID-19, l’attenzione si sposterà dalla prevenzione alla gestione del rischio individuale e all’identificazione dei membri vulnerabili della società.Stabilire i correlati dell’immunità al COVID-19 è fondamentale per identificare e trattare efficacemente questi gruppi ad alto rischio.Esistono ormai prove sempre più evidenti che l’immunità delle cellule T protegge dall’infezione da SARS-CoV-2 e limita la gravità di COVID-1910.I dati qui presentati dimostrano che la forza combinata delle risposte delle cellule T IFN-γ+ specifiche per SARS-CoV-2 contro le proteine ​​strutturali del picco, della membrana e del nucleocapside conferisce una maggiore protezione contro COVID-19 rispetto al legame degli anticorpi.19 promuove o neutralizza le risposte .e dovrebbero essere presi in considerazione quando si valuta l’immunità individuale e/o di gregge.I virus a RNA come SARS-CoV-2 o il virus dell’influenza A (IAV) evitano la neutralizzazione sierologica evolvendo rapidamente epitopi di cellule B esposti su antigeni di superficie riconosciuti dagli anticorpi.La risposta immunitaria protettiva fornita dalle cellule T può riflettere il targeting di epitopi provenienti da regioni più conservate di proteine ​​virali che non possono sfuggire rapidamente a una risposta immunitaria.La protezione mediata dalle cellule T contro le nuove varianti SARS-CoV-2 è simile alla protezione eterosottotipica mediata dal targeting delle cellule T delle proteine ​​intrinseche conservate osservata nei sottotipi IAV22,23.
Nonostante l’enorme potenziale per misurare la risposta immunitaria cellulare al COVID-19, è stata prestata relativamente poca attenzione allo sviluppo di test accurati, ad alto rendimento e standardizzati sulle cellule T.Le complessità e i costi tradizionali associati alla misurazione delle risposte delle cellule T precludono la determinazione accurata dell’immunità delle cellule T durante lo screening per l’immunità di grandi popolazioni.Sebbene recentemente siano diventati disponibili diversi test commerciali di stimolazione dei peptidi nel sangue intero, attualmente tutti richiedono un prelievo di sangue per ottenere il sangue, limitando la disponibilità e la scala.I sistemi di sangue capillare sono ampiamente utilizzati per determinare la prevalenza degli anticorpi SARS-CoV-2 in una popolazione.Abbiamo adattato i test del sangue capillare per eseguire test di stimolazione dei peptidi nel sangue intero per valutare la reattività delle cellule T alle proteine ​​strutturali della SARS-CoV-2 e alle risposte anticorpali specifiche della SARS-CoV-2.Infatti, la misurazione combinata di anticorpi specifici per SARS-CoV-2 e cellule T nello stesso campione di sangue capillare è molto interessante: (i) riduce la necessità di più esami del sangue per partecipante, (ii) migliora l’esperienza e la comprensione dei partecipanti;(iii) migliorare la logistica e ridurre le duplicazioni, (iv) ridurre l'impatto ambientale poiché sono necessari meno materiali di consumo di laboratorio e consegna di campioni.Sebbene la reattività complessiva dell'IFN-γ fosse simile tra i campioni di sangue venoso e capillare abbinati, è stato osservato che era inferiore nella coorte di sangue capillare dei partecipanti (Fig. 4a) rispetto alla coorte di sangue venoso (Fig. 2a).Valori IFN-γ Ci sono diverse spiegazioni per questo risultato, vale a dire che un gran numero di partecipanti con comorbilità che richiedevano terapia immunosoppressiva sono stati reclutati nella coorte di campionamento del sangue capillare (Tabella 1) e Vitalità e/o funzione delle cellule T ottenute da campioni vascolari i campioni possono essere bassi, soprattutto tenendo conto delle condizioni di conservazione a lungo termine dei campioni prima della stimolazione del peptide.
Il vaccino COVID-19 attualmente ampiamente disponibile fornisce la migliore protezione contro malattie gravi per la maggior parte dei riceventi entro 6 mesi dalla vaccinazione8.È incoraggiante, nonostante la scarsa neutralizzazione sierologica indotta dal vaccino delle varianti SARS-CoV-26,7, le risposte delle cellule T suscitate dalla vaccinazione contro il SARS-CoV-2 di tipo selvaggio sono rimaste altamente reattive, poiché ne sono emerse altre 25.I dati che presentiamo qui dimostrano l’importanza di una valutazione più ampia dell’immunogenicità del vaccino, evidenziando i vaccini con un’immunità delle cellule T insufficiente per prevenire l’infezione improvvisa e la trasmissione persistente del virus.Abbiamo anche osservato che molti individui non vaccinati reclutati nella coorte capillare avevano una risposta significativa delle cellule T specifiche della SARS-CoV-2 (e delle IgG leganti l’N) indipendentemente dalla precedente vaccinazione, che è probabilmente dovuta a una precedente infezione.Piuttosto che vaccinare individui idonei, il loro rischio di infezione dovrebbe essere valutato in base al loro attuale stato di immunizzazione e alle scelte informate effettuate.
I limiti di questo studio includono la garanzia che i partecipanti abbiano auto-riferito l’infezione da SARS-CoV-2 dopo il prelievo di sangue per determinare la rilevanza dell’immunità;alcuni partecipanti potrebbero avere un'infezione asintomatica e non essere in grado di sottoporsi a test PCR e/o flusso laterale per COVID-19.Nel nostro set di dati mancavano anche informazioni sui farmaci dei partecipanti al momento del prelievo di sangue.Inoltre, dato che tutti i nostri partecipanti hanno riportato solo sintomi lievi/moderati o nessun sintomo, non è stato possibile identificare risposte immunitarie dal nostro set di dati che prevedessero un aumento del rischio di malattia grave e ospedalizzazione per COVID-19.Tuttavia, la presenza di risposte delle cellule T CD8+ contro epitopi specifici del nucleocapside è stata recentemente associata alla protezione contro la forma grave di COVID-1926.Inoltre, l’analisi utilizzata qui non ha misurato le risposte delle cellule T a specifiche proteine ​​non strutturali SARS-CoV-2 espresse precocemente che recentemente hanno dimostrato di accumularsi preferenzialmente negli operatori sanitari sieronegativi che sono stati in contatto con pazienti infetti.Sulla base di questo lavoro, data la prevalenza della trasmissione comunitaria al momento del reclutamento e l’elevata probabilità di infezione da contatto nella popolazione, anche il numero di cellule T specifiche per SARS-CoV-2 trovate nei nostri test sembra essere in grado di essere eliminato.infezioni subcliniche nelle nostre coorti.Infine, non abbiamo misurato la produzione di interleuchina 2 da parte delle cellule T perché il nostro lavoro precedente ha dimostrato una scarsa identificazione delle risposte delle cellule T specifiche per SARS-CoV-214, sebbene le risposte specifiche di IL-2 possano indicare una reattività crociata preesistente.cellule associate alla difesa contro l’infezione da SARS-CoV-211.
Nel loro insieme, questi dati evidenziano la necessità fondamentale di studi longitudinali a lungo termine che incorporino le risposte delle cellule T specifiche per SARS-CoV-2 nelle misure dell’immunità su scala di popolazione.Questi sforzi potrebbero essere aiutati dallo sviluppo di un nuovo test del sangue capillare che misura la risposta delle cellule T.
Il progetto di ricerca ha reclutato partecipanti da febbraio 2021 a marzo 2022. La coorte di donatori sani (n = 148) che hanno donato campioni di sangue venoso era composta principalmente da personale universitario e studenti che partecipavano al servizio di screening COVID-19 dell'Università di Cardiff o da personale di una scuola elementare in Cardiff.Tutti i partecipanti erano altrimenti sani e non hanno riferito di aver assunto alcun farmaco immunosoppressore (vedere Tabella 1 per le caratteristiche).La coorte di partecipanti che hanno donato campioni di sangue capillare comprendeva tutti i donatori volontari (di età pari o superiore a 18 anni) provenienti da tutto il Regno Unito.Tra il 24 gennaio e il 14 marzo 2022, sono stati arruolati nello studio 342 partecipanti, di cui 299 hanno presentato campioni di sangue al laboratorio.Molti partecipanti non sono stati vaccinati e/o hanno riportato gravi comorbilità, tra cui malattie autoimmuni e cancro (vedere Tabella 1 per le caratteristiche).Questo studio ha ricevuto l'approvazione etica dal Comitato etico per la ricerca di Newcastle e North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) e dal Comitato etico per la ricerca della Scuola di Medicina dell'Università di Cardiff (rif. SREC: SMREC 21/01).Tutti i partecipanti hanno dato il consenso informato scritto prima dell'inclusione.I partecipanti non hanno ricevuto alcun compenso per la partecipazione a questo studio.
I campioni di sangue venoso sono stati ottenuti mediante puntura venosa in vacutainer (BD) da 6 o 10 ml di litio o eparina sodica.I campioni di sangue capillare sono stati ottenuti con una lancetta e poi raccolti in microcontenitori di eparina (BD).È richiesto un minimo di 400 µl di sangue;qualsiasi campione inferiore a tale importo verrà rifiutato.Altri motivi per il rifiuto del campione includevano coagulazione massiccia e/o emolisi e mancata raccolta di plasma viscoso per l'analisi (Figura 5 supplementare).Erano disponibili un totale di 299 campioni di sangue capillare per la valutazione delle risposte anticorpali, di cui 270 campioni erano disponibili anche per la valutazione delle risposte delle cellule T.
Le risposte specifiche delle cellule T SARS-CoV-2 sono state valutate utilizzando il test COVID-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) ed eseguite come precedentemente descritto14.In breve, da ciascun partecipante è stato prelevato un vacutainer venoso da 6 ml o 10 ml di eparina sodica (BD) e processato in laboratorio entro 12 ore dal prelievo del sangue.Sebbene la maggior parte dei campioni sia stata elaborata entro 24 ore, un sangue capillare di microsanguinamento eparinizzato (BD) da 400-600 μl è stato raccolto entro 48 ore dal prelievo dal polpastrello.I campioni di sangue venoso e/o capillare sono stati stimolati con pool peptidici separati specifici per SARS-CoV-2 (variante wild-type) come precedentemente descritto14.Questa libreria peptidica contiene 420 sequenze di 15-meri con 11 amminoacidi sovrapposti che coprono l'intera proteina spike (S1 e S2) (S; proteina NCBI: QHD43416 1), fosfoproteina nucleocapside (NP; proteina NCBI: QHD43423 2) e glicoproteina di membrana (M ; Proteina NCBI: sequenze codificanti QHD43419 1) (denominate "libreria di peptidi combinatori S-/NP-/M").Tutti i peptidi sono stati purificati a >70%, sciolti in acqua sterile e utilizzati ad una concentrazione finale di 0,5 μg/ml per peptide.I campioni sono stati incubati a 37°C per 20-24 ore.Le provette sono state quindi centrifugate a 5000×g per 3 minuti e dalla parte superiore di ciascun campione di sangue sono stati raccolti circa 150 µl di plasma.Conservare i campioni di plasma a -20°C per un massimo di un mese prima di eseguire i test di rilevamento di citochine/anticorpi.
L'IFN-γ è stato misurato utilizzando il set IFN-γ ELISA MAX Deluxe (BioLegend, numero di catalogo 430116) ed eseguito secondo le istruzioni del produttore.Immediatamente dopo l'aggiunta della soluzione di arresto (2N H2SO4), la micropiastra è stata letta a 450 nm utilizzando un lettore di piastre BioLegend Mini ELISA.L'IFN-γ è stato quantificato mediante estrapolazione della curva standard utilizzando GraphPad Prism.I valori inferiori al limite di rilevamento inferiore del test sono stati registrati come 7,8 pg/ml, i valori al di sopra del limite di rilevamento superiore del test sono stati registrati come 1000 pg/ml.
Gli anticorpi IgG anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N sono stati misurati utilizzando un pannello Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex (Bio-Rad, cat. n. 12014634) ed etichettati secondo istruzioni del produttore.Istruzioni .I campioni che riportavano valori superiori al limite di quantificazione sono stati rianalizzati ad una diluizione 1:1000.L'intensità media della fluorescenza delle sfere è stata misurata su uno strumento Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Le concentrazioni di anticorpi sono state calcolate mediante il test di controllo singolo VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) e convertite in unità standard di riferimento internazionali WHO/NIBSC 20/136 (BAU/mL) utilizzando il fattore di calibrazione del produttore.
Gli anticorpi neutralizzanti specifici della subunità S1 e RBD contro le linee SARS-CoV-2 wild-type e delta (B.1.617) sono stati misurati utilizzando il kit Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio -Rad, codice 12016897), secondo le istruzioni del produttore.Misurare l'intensità media della fluorescenza sul Bio-Plex 200 (Bio-Rad) e calcolare la percentuale di inibizione (ovvero, neutralizzazione) utilizzando la seguente formula:
I test di neutralizzazione infettiva per SARS-CoV-2 sono stati eseguiti come descritto in precedenza28.In breve, 600 PFU di SARS-CoV-2 wild-type sono state incubate con diluizioni seriali tripli di plasma in duplicato per 1 ora a 37°C.La miscela è stata quindi aggiunta alle cellule VeroE6 per 48 ore.I monostrati sono stati fissati con paraformaldeide al 4%, permeabilizzati con NP-40 allo 0,5% e incubati per 1 ora in tampone bloccante (PBS contenente 0,1% di tween e 3% di latte scremato).L'anticorpo primario (anti-nucleocapsid 1C7, Stratech) è stato aggiunto al tampone bloccante per 1 ora a temperatura ambiente.Dopo il lavaggio, un anticorpo secondario (anti-topo IgG-HRP, Pierce) è stato aggiunto al tampone bloccante per 1 ora.I monostrati sono stati lavati, sviluppati utilizzando Sigmafast OPD e letti su un lettore di piastre Clariostar Omega.In ogni esperimento sono stati inclusi come controlli pozzetti senza virus, senza virus ma senza anticorpi e sieri normalizzati che mostravano attività intermedia.
L'analisi statistica è stata effettuata in GraphPad Prism (versione 9.4.1).La normalità del set di dati è stata testata utilizzando il test di Shapiro-Wilk.Per tutti i confronti sono stati utilizzati criteri non parametrici.Per i campioni non appaiati è stato utilizzato il test di Mann-Whitney.Tutti i test erano a due code con una soglia di significatività nominale di P ≤ 0,05.
L'analisi esplorativa iniziale del set di dati è stata eseguita in R (versione 4.0.3).Ciò include lo sviluppo della matrice di correlazione dei ranghi univariati di Spearman, in cui la correlazione tra due variabili è rappresentata dalla dimensione e dal colore dei quadrati.La significatività statistica tra le associazioni è stata calcolata utilizzando il rho di Spearman, dove i valori ≤0,05 sono stati considerati significativi.I confronti non statisticamente significativi sono stati esclusi dalla matrice e contrassegnati con celle vuote.I valori P sono stati aggiustati per confronti multipli utilizzando la correzione di Holm.È stato utilizzato un modello di regressione logistica binaria per simulare l’effetto delle variabili nel set di dati sulla risposta positiva al COVID-19.Le risposte delle cellule T IFN-γ e i punteggi dei titoli IgG anti-RBD/S1/S2/N sono stati convertiti in fattori, in cui ciascun individuo è stato assegnato al quartile appropriato per ciascun punteggio.Successivamente è stato sviluppato un primo modello di ricerca utilizzando la funzione glm nel pacchetto statistico (V4.0.3).I rapporti di probabilità derivati ​​da questo modello originale sono stati estratti dai coefficienti del modello utilizzando la funzione 'odds_plot' nel pacchetto OddsPlotty (V1.0.2).Durante lo sviluppo del modello di convalida incrociata, abbiamo utilizzato la funzione "bestglm" del pacchetto bestglm (V0.37.3) per limitare la distorsione dell'utente e garantire che sia possibile selezionare il miglior sottoinsieme di predittori.Il metodo scelto è stato “esaustivo” e il criterio informativo utilizzato per valutare l’adattamento del modello è stato l’AIC.Lo stesso flusso di lavoro descritto sopra è stato utilizzato per ottenere l'odds ratio.
Per ulteriori informazioni sulla progettazione dello studio, consultare l'abstract dello studio Nature collegato a questo articolo.
Lettere e richieste di materiali devono essere indirizzate al Dr. Martin Scarr o al Professor Andrew Godkin.Questo articolo fornisce i dati originali.
Il codice R utilizzato per creare modelli statistici è disponibile al pubblico senza richiesta29.Informazioni e licenze sulla ristampa sono disponibili su www.nature.com/reprints.
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